El cultivo celular es una técnica bastante utilizada en las ciencias de la vida; sin embargo, su uso constante y dinámico   puede volverla un poco compleja. Cuando trabajamos con cultivos celulares, podemos tener diferentes tipos de problemas, como cambios graduales o abruptos en las tasas de crecimiento, unión celular inconsistente,  resultados experimentales inexplicables o patrones de crecimiento inusuales o desiguales. Al momento de buscar la causa y solución a estos problemas, es común que pensemos que las variables de error provienen solamente de  la calidad de los productos comerciales que estamos utilizando por ejemplo: cambios o errores en el proceso de fabricación, problemas con los medios de cultivo y sueros, o que quizás el proceso de tratamiento superficial en los recipientes de cultivo celular, no se realizó correctamente.

Identificar las causas subyacentes de los problemas con nuestros cultivos celulares suele ser una tarea difícil que requiere mucho tiempo y conocimiento. Corning Life Sciences, ha pasado muchos años ayudando a los clientes a lidiar con estos problemas. Esta guía es el resultado de la experiencia obtenida al trabajar de la mano  con  clientes alrededor del mundo y está diseñada para ayudar a identificar y resolver de manera más eficiente algunas de las causas comunes y poco comunes de los problemas de cultivo celular, centrándose en la técnica, las incubadoras y los medios.

Tratamiento de superficies

Gran parte de la sospecha que rodea a los recipientes de cultivo celular, se debe a la falta de comprensión sobre el proceso de tratamiento utilizado para modificar la superficie del plástico. El poliestireno virgen, es una resina utilizada para fabricar la mayoría de los recipientes de cultivo celular, que en condiciones no tratado es hidrofóbico. Proteínas importantes para la unión celular, como la fibronectina y la vitronectina (presentes en el suero) no se unen bien a esta superficie natural, lo que provoca una adhesión y un crecimiento celular deficientes.

Debido a esto, Corning utiliza un tratamiento (Tratamiento de superficie estándar 430167, 3524, 353224) de descarga de plasma para insertar átomos de oxígeno (en forma de grupos carboxilo, hidroxilo y cetona) (Figura 1), en la columna vertebral de la cadena de poliestireno. Esta alteración del polímero, da como resultado una superficie hidrófila con una carga neta negativa que crea una superficie adecuada para la unión y el crecimiento celular. Luego, los recipientes de cultivo se esterilizan y se evalúan minuciosamente mediante pruebas de control de calidad para garantizar que recibieron el grado adecuado de tratamiento.

Figura 1. Después del tratamiento, la cadena de poliestireno hidrofóbico se oxida a una superficie hidrofílica más humectable para una mejor unión celular.

Visualmente no hay manera de diferenciar las placas tratadas de las no tratadas, por lo que es muy importante leer detenidamente el empaque de las placas para asegurarse de que recibió el tratamiento de superficie estándar para el cultivo celular.

Corning también ofrece varios tratamientos de superficie celular para una mejor adhesión celular en aplicaciones especiales, incluidas la superficie Corning® CellBIND® 3296, Corning Primaria™ 353803, Corning PureCoat™ Amine 354723 y PureCoat Carboxyl 354775 

Problemas relacionados con la técnica

Durante la manipulación y mantenimiento de las células, existe una alta probabilidad de que ocurra un problema de contaminación o que los cultivos no estén creciendo adecuadamente. A menudo, estos problemas se pueden observar cuando las células se examinan microscópicamente. A continuaciónse revisarán algunos de los principales problemas de crecimiento en recipientes de cultivo celular.

Fijación celular deficiente o lenta

Cuando se cambia de medios con suero a medios sin suero, se eliminan proteínas importantes para la unión celular, esto  obliga a las células a fabricar sus propias proteínas. Sin embargo, sepuede necesitar varios pasajes antes de que las células se adapten por completo. Para ayudar a las células con este proceso, se pueden utilizar recipientes de cultivo recubiertos con proteínas de unión como colágeno 354416, o matriz extracelular 344600 https://uniparts.com.mx/buscar.php?src=matrigel. 
Nota: Colocar el medio de cultivo y los recipientes en la incubadora antes de realizar la siembra inicial de células ayudará a que las células se adhieran más rápidamente.